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常见小鼠采血要领
小鼠是科研实验中常用的实验动物,,但由于其体积。。芟福裳讯却螅跋觳裳闹柿。。
ELK简要总结了常见的小鼠采血要领,,仅供参考:
一只成年小鼠的循环血量约莫是1.5~2.5ml,,约莫体重的 6~8%。。在对营养状态优异的小鼠举行采血时,,单次采血量最多可以抵达循环血量的10%,,(例:若20克小鼠,,它的总血量约占1.2-1.4毫升,,即每次取120ul-140ul血液不会对小鼠有太大的影响)。。采血之后应该给予温热的等渗溶液增补,,可以在2~3个星期内恢回复有的水平。。两周采血量小于血液循环的10%,,单周小于7.5%,,小鼠血液循环72ml/kg
实验室常用抗凝剂:乙二胺四乙酸(EDTA)盐、枸橼酸盐、草酸盐、肝素

实验室常用采血管:(采血后连忙倒置混匀8次)
1.玄色:枸橼酸钠;;;;血沉

2.浅蓝色:枸橼酸钠;;;;血凝试验(如PT、APTT)
3.深蓝色:肝素钠或EDTA-Na2;;;;血液微量元素
4.紫色:EDTA-K2;;;;血通例(血液细胞剖析)

5.绿色:肝素锂;;;;大部学生化、血氨
6.灰色:血糖降解抑制剂和EDTA-Na2;;;;血糖
7.棕色:肝素钠或EDTA-K2;;;;血铅
8.浅黄色ACD管:葡萄糖、抗凝剂;;;;血库试验
9.浅黄色SPS管:SPS液、氯化钠溶液;;;;血液作育、微生物作育

尾尖采血
麻醉小鼠后,,用温水(但水温不要过高)擦拭尾巴,,引起稍微的血管扩张。。
用无菌手术刀、刀片或尖锐的铰剪,,快速截断小鼠尾尖0.5-1cm。。若是需要多次采血,,之后每次仅需截除2-3mm。。
可以从尾部向尾尖偏向推拿,,以增添血流(可是,,这会降低血样的质量,,增添溶血的危害)。。也可以用毛细采血管网络血液,,或直接滴入网络管中。。采血竣事后,,按压伤口或使用止血剂(如硝酸银,,6%液体火棉胶)来止血。。每次采血量约莫可达0.1ml。。
眼眶静脉丛采血
优点:眼眶后静脉丛采血法要领简朴,,便于掌握。。血流较快,,采血量多,,能在较短时间内采约0.5mL血。。伤口较。。辖峡。。乐成率高,,殒命率低。。
弱点:不可阻止组织液的混入,,关于血样要求较高的研究应审慎使用。。
小鼠经气体麻醉后,,左手拇指及食指榨取小鼠的颈部两侧,,阻碍静脉回流,,使眼球充分外突,,提醒眼眶后静脉丛充血。。也可以将小鼠安排在侧卧位,,拇指与食指划分置于小鼠头顶和下颌,,将皮肤向后及向下拉。。抓握时要阻止对气管施压,,不然可能会影响小鼠呼吸。。
将毛细采血管(建议接纳0.5*100mm规格的毛细管,,在使用前折成小段,,每段约莫3-4cm)置于内侧眼角处,,并且以与鼻翼平面成30-45度沿内眦插入内眼角,,滑入眼球后方,,轻轻向眼底偏向刺入。。
当感应有阻力时即轻轻旋转采血管的同时施加压力以切开静脉丛,,血液将通过毛细作用流入采血管。。不可刺地过深,,一样平常2-3mm即可。。
采血竣事后,,连忙松开手指对小鼠的榨取,,使眼球复位,,同时将采血器拔出。。浚可用干棉球压住眼眶,,确保止血。。一样平常眼眶静脉丛采血量可以抵达0.2-0.3ml。。
颌下静脉采血
绑定小鼠,,可将小鼠侧卧,,使小鼠头部只管牢靠。。在小鼠嘴角沿线与外眼角线橡胶处找到颌下静脉的大致位置,,会发明一个无毛的小点,,有点像酒窝,,基本位于嘴角远端稍低于下巴线。。
针坚持笔直于皮肤外貌,,刺入皮肤。。深度不凌驾针头的斜面(约3mm)。。拔出针头后,,血液就会流出。。为利便采血,,可使小鼠头部低于心脏高度。。采血竣事后,,按压以止血。。一样平常采血量为0.2-0.5ml。。
隐静脉采血(总量5%)
将小鼠置于牢靠管或架中,,但坚持后腿可自由运动,,剃除跗部的毛。。为使膝盖与踝枢纽之间的隐静脉越发显着,,可以在后腿膝盖以上使用止血带。。在近尾侧的皮肤外貌可以找到隐静脉。。
针笔直于皮肤外貌扎破血管。。不要进针过深,,以免刺穿肌肉或遇到骨头。。血液会从入针处逐步流出,,用毛细采血管网络,,并松开止血带。。采血竣事后,,按压伤口或使用止血剂(如硝酸银)以止血,,并将小鼠放回笼内。。
舌下静脉采血
将小鼠麻醉后仰卧于实验台面上并牢靠。。用眼科弯镊将小鼠舌头拉出,,可显着看到小鼠舌下静脉。。
持采血针与舌面呈10°夹角插入舌下静脉,,见有回血缓慢抽。。敝敛傻剿柩。。
颈静脉采血
该要领采血量( 0.2 ml至近全血量) 及采血次数( 1~8次/d) 可随剖析目的而变换,适用于人手少、动物数目多、实验时间紧以及药代动力学等需一连少量取血的研究中。。但要求手艺熟练, 方能驾轻就熟。。在一准时间内, 若是采血量和采血次数增添, 会使动物引起一定的应激性反应或采血部位的危险。。
将动物胸前区采血部位皮肤消毒, 于胸前正中线约第四肋骨水平先用注射器针头沿水平偏向刺入皮肤。。
再向颈静脉所在位置沿皮下进针, 针头抵达颈静脉所在位置时, 轻引注射器内筒使之呈负压, 再使注射器与胸部外貌成30°~ 40°角向颈静脉刺入, 此时注射器应与颈静脉走行偏向相一致。。
在刺入历程中, 速率要缓慢, 刺入的深度约5 mm, 在试探性缓慢刺入或拔出时, 若有血液自动流入注射器内筒, 说明针尖已在颈静脉内, 此时牢靠好动物, 勿使注射器针头移动。。
也可将采血针抵在动物胸骨上以便于操作, 小心抽引注射器内筒, 待血液足够时, 拔出采血针, 用干棉球按压止血。。
尾静脉采血
一小我私家可以用微型手电筒或LED小夜灯等紧贴尾静脉,,在灯光的照射下,,尾静脉会被很清晰的显示,,提高乐成率。。
牢靠器(自行设计)小鼠,,将尾巴拉直,,用酒精棉球擦拭尾巴或者用热水或者热毛巾焐热尾巴(热水浸泡鼠尾), 使尾部静脉扩张。。
用左边手的食指,,中指,,无名指及大拇指将小鼠尾巴牢靠。。
握住1ml 注射器(选用29G的针头为宜)前面0.1ml处,,右手小指搭在拽着鼠尾的左手拇指处斜15°角缓慢进针(鼠尾远端约1/3的位置)。。适当增添内压看有无回血,,若有回血则缓慢抽取所需血量,,棉签按压止血。。
颌下静脉采血
将小鼠麻醉后,,平躺安排在实验台面上,,中指、食指牢靠小鼠尾部。。
用刀片轻划小鼠尾侧静脉或尾正中动脉。。待血液流出后,,用移液枪吸收血液。。取血完毕后,,棉签按压止血。。
腹自动脉采血
优点:采血法取血量大、不易溶血,,血液质量较好,,适用于多项目检测,,且不损伤器官,,有利于病理组织学检查。。
弱点:操作较量重大,,应注重掌握适当的麻醉深度,,避免心跳骤停,,同时避免大鼠躁动。。本要领造成的出血速率快,,易造成出血性的心脏停跳,,故要避免采血历程中出血。。且本要领采血历程中如多次采血不宜拔出针头。。
将大鼠腹腔注射镇痛剂后,,直到身体全身变软,,把大鼠仰卧牢靠在手术台上,,背部可以安排—粗试管以充分袒露腹自动脉。。
通例消毒后用手术铰剪沿腹正中线剪开腹腔,,用小镊子轻轻扒开血管周围脂肪,,再用棉球把笼罩在血管的多余脂肪擦清洁,,直到清晰看清血管为止(用棉球可以只管镌汰小血管破碎出血,,影响接下来进针时的视线)。。
找腹自动脉(粉)在脊柱上面,,腹腔静脉血管(比腹自动脉粗,,黑)旁,,找到后,,术者先牢靠血管,,尽可阻止血管移位,,左手拇指和食指牢靠住血管两旁的脂肪及其它脏器,,无名指按住血管进针点的上端,,降低血压,,可以阻止血液溅出。。
右手持穿刺针,,针尖斜面朝下,,入针角度约(小于)30度左右,,朝向心端偏向刺入,,深度以5m左右为宜,,进针后可以用止血夹夹住针头,,可以阻止麻醉不敷挣扎导致血管被针头戳破。。
取完血后,,用棉球轻压针眼处,,快速拔出针头,,可以重复屎厕多管的血样举行差别项目的测试(一样平常体重200~300g大鼠可采血液8~10mL)。。
心脏采血(非必需勿用)
优点:取血快,,血液不易凝集,,心区面积大,进针准确性较高,可一针见血,且采血量能知足大宗试验需要。。
弱点:采血乐成率较。。婷矢撸脑嗨鹕私洗螅岩匝杆儆希乖擞诙唐谝涣裳辔薹ㄈ范ㄊ蔷猜鲅站啥鲅。。
一样平常有3种心脏采血的姿势:1、托起小鼠躯干使身体笔直与地面。。身体直立以避免心脏的偏转或胸部的扭曲。。使用1毫升注射器和22g针头。。将针头从胸部中央向下5mm处插入,,深度5-10mm,,将注射器与胸部坚持25-30度;;;;2、使小鼠仰卧牢靠,,剪去胸前区被毛,,皮肤消毒后,,用左手食指在左侧第3~4肋间触摸到心搏处,,右手持带有4~5号针头的注射器,,选择心搏最强处穿刺;;;;3、使小鼠侧卧,,笔直于胸壁插入针头。。
若是血液没有连忙进入注射器,,可以轻轻抽闲针管,,爆发一个真空区。。
当注射器中泛起血液时,,将针管坚持静止并轻轻地抽拉活塞芯杆,,以获得更多的血液。。一样平常可以采到0.8-1.0ml血液。。
摘除眼球采血
用左手拇指、食指和中指抓取小鼠的颈部头皮,,小指和无名指牢靠尾巴,,轻压需要摘取的眼部皮肤,,使眼球充血突出。。
用眼科剪剪去小鼠的髯毛,,避免血从髯毛处顺流而下引起溶血。。
用眼科弯镊夹取眼球并快速摘。。⑹寡捍友劭裟诹魅0.5mlEP管中。。待小鼠取血完毕后,,断颈正法。。
断头采血
用左手拇指和食指以背部较紧的捏住小鼠颈部皮肤,,并作小鼠头部朝下的姿势。。
右手用铰剪猛剪鼠颈,,约1/2-4/5的颈部剪断,,让血滴入容器中。。
全血、血浆、血清的区别

全血包括血细胞和血浆的所有因素。。收罗全血时,,网络管中必需含有抗凝剂。。常用的抗凝剂有:肝素、柠檬酸钠和乙二胺乙酸酸 (EDTA)。。凭证差别研究需要举行选择。。
血浆是全血经抗凝处置惩罚后,,通过离心沉淀,,获得的不含细胞因素的液体。。含有纤维卵白原、凝血因子等。。
血清是全血未经由抗凝处置惩罚,,血凝块聚缩释出的液体。。其中没有纤维卵白原和凝血因子。。
疏散血浆和血清的一样平常要领是:2200-2500rpm 离心至少15分钟。。
正常的血清或者血浆样本为黄色清液,,而若为偏红,,即为有红细胞破碎而爆发溶血征象。。阻止溶血应注重以下的事项:
1.采血时要阻止小鼠毛发、油脂沾染血液导致溶血,,所用的容器、注射器必需清洁干燥,,不可有水或者有机溶剂。。
2.抽血时速率不要太快,,速率太快会有气泡爆发。。若是使用止血带时,,止血带不要扎的太久。。
3. 抽出的血放入试管时,,要先拔掉针头再放血,,同时速率不要太快。。
4. 网络疏散血清的全血时应只管使血液直接进入小管底部,,阻止管壁或管盖上的血液在离心历程中导致溶血
样本泛起溶血还可以用ELISA要领检测吗??
血样收罗操作失误、强力震荡和多次冻融都有可能引起溶血爆发。。
在ELISA检测中,,若样本溶血稍微(浅红色),,仍可做ELISA检测,,建议适当增添洗板次数,,镌汰配景过高影响;;;;若溶血严重(深红色),,建议重新取样。。
样本溶血可能会引起ELISA检测OD值升高、效果假阳性。。
缘故原由可能是样本中游离的血红卵白非特异性吸附在酶标板上,,血红卵白中的亚铁血红素具有类似过氧化物酶的活性,,其作用类似于辣根过氧化物酶,,进而催化底物的反应以增添样品的OD值并引起假阳性。。
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