意大利贵宾

酶联免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作
，，可以简朴地回覆样本中有几多卵白质/多肽/抗体这一基本问题
，，是科研中较量常用的一种检测要领。
。而这种简朴的剖析要领的焦点
，，就是标准曲线。
。没有它
，，意大利贵宾实验就酿成了一个二元的“是/不是”测试。
。有了它
，，我们可以深入研究生物反应的细节。
。那么
，，是什么使得标准曲线云云强盛呢?让我们在ELISA的配景来讨论这个问题。
。

简朴地说
，，标准品就是一系列已知目的卵白数目的阳性比照。
。例如
，，若是对人类IgG举行ELISA检测
，，标准曲线将包括逐渐镌汰的已知量的人类IgG
，，它会让你连忙得出一系列的结论。
。

是否可以看到标准品的信号？
？？？若是可以
，，实验是好的；；；；若是没有
，，就应该举行故障扫除。
。也许抗体问题
，，或者系统中的其他工具没有获得优化。
。

这是一个较量棘手的问题。
。当标准浓度下降时
，，信号是否镌汰？
？？？若是谜底是一定的
，，那就是一个好的最先。
。若是谜底是否定的
，，可能在某些办法引入了一些配景
，，或者移液管可能需要校准。
。

一组适当的标准品总是以空缺竣事
，，在空缺孔中不保存标准品。
。若是空缺孔OD值为>0.1
，，说明可能引入了一些配景。
。

 

 

这是我们市场部同事在做实验培训时做的“人C反应卵白(CRP)酶联免疫吸附检测试剂盒（ELK1040）”这个指标的标曲数据（新人已记不清上一次拿移液器是几多年前）。
。

 

 

 

用于免疫检测的所谓“标准曲线"着实称为拟合曲线较量合适。
。免疫检测时标准点（可以是倍比稀释的
，，也可以不是）浓度若是和响应的吸光度（OD）值若是能够泛起直线关系虽然是最理想的了
，，这时可以通过Excel等利便的获得拟合曲线
，，进而推算出样品的浓度值。
。但我们做免疫检测很少有时间能够有这么理想的情形
，，标品浓度和响应OD值往往是"S"型的曲线关系
，，这时就不可用直线拟合的方法了
，，而对拟合要领举行选择就是须要的了。
。

关于标准曲线的拟合方法
，，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合
，，但都只适用于曲线的一部分
，，有的适用于前半段
，，有的适用于后半段
，，有的适用于中心一段
，，而Logistic曲线则对曲线的所有都有较好的适用性。
。虽然
，，若是用于定量
，，照旧在中心一段较好。
。这些要领虽然没有一种要领可以通用
，，但也都可以用。
。要害在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分
，，你想检测的样品浓度在曲线的哪一部分。
。在S曲线的低浓度部分可以用乘幂方程很好的拟合
，，中低浓度部分可以用直线方程
，，中心部分可用对数方程
，，而中后段可用四参数。
。

现在国际上普遍接纳的免疫检测拟合方法是“四参数逻辑拟合"
，，用这种拟合方法往往能够较量的反应浓度和吸光度的曲线关系
，，从而进一步较量准确的获得样品中待测物质的浓度。
。着实
，，在一个长的区间内
，，Logistic应该都能拟合得较为理想。
。但并不是说它就是的。
。事实上不但是ELISA
，，其它许多生物学反应都是S形曲 线
，，也都可以用Logistic曲线拟合。
。但建模子是一回事
，，而用它来定量是另一回事。
。若是用来定量
，，S形曲线的中心段（较陡处）是较量好的
，，而两头的平展部分盘算误差会大
，，有时甚至会很大。
。

二、做标准曲线样品检测时有几个问题需要注重

1、样品的浓度等指标是凭证标准曲线盘算出来的
，，以是首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要主要的一件事
，，不然后面的实验效果无从谈起。
。

2、设置标准曲线样品的标准浓度规模要有一个较量大的跨度
，，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度
，，即样品的浓度要在标准曲线浓度规模之内
，，包括上限和下限。
。而关于呈S型的标准曲线
，，只管要使实验样品的浓度在中心坡度最陡段
，，即曲线险些成直线的规模内。
。

3、最好接纳倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度
，，这样就能够包管标准样品的浓度不会泛起较大的偏离。
。

4、检测标准样品时
，，应按浓度递增顺序举行
，，以镌汰高浓度对低浓度的影响
，，提高准确性。
。

5、标准曲线的样品数一样平常为7个点（除去零孔、配景孔）
，，但至少要包管有5个点）。
。

6、做出的标准曲线相关系数因实验要求差别而有所变换
，，但一样平常来说
，，相关系数R至少要大于0.90（至少要有一个九）
，，关于有些实验
，，至少要0.99甚至是0.999。
。